胰島素(INS)放免試劑盒使用詳情

胰島素是由胰臟內(nèi)的胰島β細胞受內(nèi)源性或外源性物質(zhì)如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一種蛋白質(zhì)激素。

[使用目的] 用于定量測定人血清或血漿中胰島素（Ins）的濃度。

[用途] 胰島素的測定主要用于對糖尿病的分型，即通過胰島素釋放實驗，區(qū)分糖尿病的類型。 另外對于研究胰島素β細胞的分泌功能、胰島素瘤的分析、探討冠心病機理等也有一定的意 義。

[試驗原理] 本品采用了第二抗體＋聚已二醇沉淀法放射免疫分析試驗原理：含胰島素（Ins）的樣 品和 125I 標記的胰島素（Ins）與相應(yīng)的抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物。反應(yīng)后加入二抗及 PEG，使免疫復(fù)合物沉淀，離心，測沉淀放射性計數(shù)。通過標準曲線得到樣本中胰島素（Ins） 的濃度。

[使用前準備] 試驗前，恢復(fù)樣本至室溫，小心搖勻血清樣本。 

[實驗方法] 

1、 將實驗所需試劑及樣本放置室溫，凍干品按操作要求進行溶解,平衡至少 30 分鐘 以上才可進行操作； 
2、 取 60X12mm 聚苯乙烯管進行編號，所有實驗均做雙管重復(fù)； 
3、 每個 NSB 管加入 200µl 溫育液，每個標準品“0”管 加入 100µl 溫育液； 
4、 取每個濃度的標準品（A~F）、質(zhì)控血清和樣本 100µl 加入相應(yīng)編號的試管中； 
5、 每管均各加入 100µl 標記物工作液； 
6、 每管均各加入 100µl 抗體工作液，充分混勻； 
7、 37℃溫育 2 小時； 
8、 每管均各加入 500µl 分離劑后，充分混勻； 
9、 室溫放置 15 分鐘后，離心 3500 轉(zhuǎn)／分，20 分鐘后，吸去或傾倒掉上清液； 
10、 用 γ-計數(shù)器測定各管計數(shù) CPM. 檢測時間: 1 分鐘； 
11、 從標準曲線上讀取樣本及質(zhì)控血清的濃度。

[實驗過程中應(yīng)注意] 

1、 γ-計數(shù)器本底計數(shù)應(yīng)≤100CPM/分，效率應(yīng)≥75％； 
2、 加入放射性標記物時，應(yīng)做好防護、小心謹慎，以避免造成放射性污染； 
3、 如果某一個樣本的測定值高于高濃度的標準品濃度，用零標準品以 1：2 或 1： 4 的比例稀釋樣本后重新測試，測試結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

[質(zhì)量控制] 每次實驗操作應(yīng)至少采用兩個濃度的質(zhì)控血清進行質(zhì)量控制，以確保每次實驗測定結(jié)果 的可靠性。 100 100 

1、 質(zhì)控血清的平均值應(yīng)在允許范圍內(nèi)；
2、 曲線方程應(yīng)采用擬合方式；
3、 重復(fù)樣本的測定結(jié)果相差在 15％以內(nèi)。 如不能同時滿足以上條件，則此次試驗結(jié)果無效，全部試驗需重新進行。

[測定結(jié)果的計算] 

1、 計算標準品（A~F）、質(zhì)控品和樣品與標準品 0 的比值（B/B0）; 
2、 劑量-反應(yīng)曲線按“對數(shù)劑量-結(jié)合率對數(shù)”（Log(dose-Log(B/Bmax))數(shù)學模型 或四參數(shù)數(shù)學模型擬合，通過每個標準品的 B/B0和其濃度建立標準曲線； 
3、 從標準曲線上查出樣本的濃度值，B/B0不在標準曲線之內(nèi)的樣本及其濃度

 

胰島素(INS)放免試劑盒實驗過程需要注意這幾步