牛凝-血酶Thrombin
 
簡(jiǎn)介：凝-血酶（Thrombin）來(lái)源于牛血漿，分子量37KD，是由兩條肽鏈（31KD和6KD）通過(guò)二硫鍵組成的。凝-血酶是凝-血酶原（凝-血因子Ⅱ）激活后形成的蛋白質(zhì)水解酶，其催化纖維蛋白原（fibrinogen）水解掉A肽和B肽，由此形成纖維蛋白單體，單體進(jìn)一步聚合。
由于凝-血酶具有切割序列專一性強(qiáng)，水解效率高的特點(diǎn)，它被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)，其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂，尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研究。

來(lái)源：牛血漿
性狀：白色或微黃色凍干粉
規(guī)格：1000U/支
保存：凍干粉4-8℃保存2年
純度：SDS-PAGE電泳純度≥95%（無(wú)蛋白酶）
比活：≥2000U/mgpr
使用方法：生理鹽水溶解使用，復(fù)溶后-20度凍存，避免反復(fù)凍融
用途：凝-血酶時(shí)間檢測(cè)試劑（TT）配制、纖維蛋白原檢測(cè)試劑（FIB）配制、TB位點(diǎn)酶切、納豆激酶活力測(cè)定、尿激-酶活力測(cè)定等,非臨床治療使用。

凝-血酶是一種廣泛用于切割標(biāo)簽的蛋白酶，能夠有效切質(zhì)量比僅為1:2000的蛋白。建議消化緩沖液:20mMTris-HCl緩沖液，150mM NaCl，pH8.0，于20℃到37℃之間切割0.3到16小時(shí),1U可切割約0.1-0.5mg蛋白。
凝-血酶良好切割位點(diǎn)是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',這里X4和X3是疏水氨基酸而X1'和X2'是非酸性氨基酸，一些經(jīng)常使用的識(shí)別位點(diǎn)L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之間切割比在4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他識(shí)別位點(diǎn)是X2-R[K]-X1',這里X2或者X1'是甘-氨酸，例如A-R-G和G-K-A，這里切割發(fā)生在第二個(gè)殘基后。在凝-血酶切割位點(diǎn)和N末端標(biāo)簽之間插入五個(gè)甘-氨酸殘基可改善切，通過(guò)這一"甘-氨酸連接肽"只需較少酶量就可達(dá)到切割,而且也可以避免可能發(fā)生的錯(cuò)誤切割。凝-血酶可從切割產(chǎn)物中用p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖移去。
 
實(shí)驗(yàn)室操作注意事項(xiàng)：
1.實(shí)驗(yàn)時(shí)根據(jù)試驗(yàn)的情況和性質(zhì)進(jìn)行必要的防護(hù)。根據(jù)試驗(yàn)可能發(fā)生的危險(xiǎn)事故佩戴必要的防護(hù)工具，例如穿好試驗(yàn)服，戴橡膠手套，防護(hù)面具，防毒面具等。實(shí)驗(yàn)前，要注意清理試驗(yàn)場(chǎng)周圍的安全隱患。檢查試驗(yàn)裝置、藥品和相關(guān)物品是否有不符合要求的情況等。
2.遵循化學(xué)藥品的性質(zhì)和化學(xué)反應(yīng)的規(guī)律，不盲目蠻干和主觀臆測(cè)化學(xué)反應(yīng)的過(guò)程。應(yīng)根據(jù)化學(xué)反應(yīng)的性質(zhì)和過(guò)程選擇匹配的反應(yīng)裝置，不可圖省事省去必要的安全措施。
3.經(jīng)常估計(jì)到實(shí)驗(yàn)的危險(xiǎn)性
實(shí)驗(yàn)事故雖不可預(yù)測(cè)，但其危險(xiǎn)性的大小是可以估計(jì)到的。即使對(duì)不大了解的實(shí)驗(yàn)，也必須推測(cè)其危險(xiǎn)程度而制訂相應(yīng)的預(yù)防措施。象下面這類實(shí)驗(yàn)，必須十分注意。
①不了解的反應(yīng)及操作;
②存在多種危險(xiǎn)性的實(shí)驗(yàn)(如發(fā)生火災(zāi)、毒氣等);
③在嚴(yán)酷的反應(yīng)條件(如高溫、高壓等)下進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。
4.充分作好發(fā)生事故時(shí)的預(yù)防措施并加以檢查。
平時(shí)注意熟悉需要關(guān)閉的主要龍頭、電氣開(kāi)關(guān)，滅火器的位置及操作方法，避免發(fā)生事故時(shí)才四處尋找應(yīng)急的物品。
5.實(shí)驗(yàn)的后處理。實(shí)驗(yàn)的后處理工作，亦屬實(shí)驗(yàn)過(guò)程的組成部份。特別不可忽略回收溶劑和廢液、廢棄物等的處理。

牛凝-血酶Thrombin